2019-08-05
正確采集、運送、接收和保存樣本是獲得準確、可靠檢驗結果的首要環節,但臨床檢測樣本種類多樣,比如檢測非洲豬瘟病原學樣品就包括:唾液、全血、血清、組織、蜱、環境拭子等。
不同的樣品需要選擇合適的前處理和核酸提取方法,除去蛋白、脂類和核酸酶等干擾核酸擴增的物質,對保證檢測結果的準確性十分重要。
其中,核酸提取的成敗關系到臨床PCR檢驗的正確與否,也是最容易出問題的環節。
而核酸提取又跟樣品的前處理密切相關,不同的樣本類型,樣品的前處理過程會有差異。
常見樣品的前處理過程(簡化版)
1. 唾液:取唾液樣品1ml加入1.5ml離心管中,離心3分鐘,沉淀雜質,取上清液200ul用于核酸提取。
2. 全血:直接從采集的血樣中取200ul用于核酸提取。
3. 血漿:取1ml的抗凝血加入1.5ml離心管中,離心(3000rpm)5分鐘,取上清液200ul用于核酸提取。
4. 血清:取1~2ml新鮮血液靜置待血清析出或離心(3000rpm)5分鐘,取上清液200ul用于核酸提取。
5. 拭子:適用于鼻拭子、肛門拭子、咽拭子、水泡拭子等。將棉拭子樣本置于1.5ml離心管中;加入1ml生理鹽水,生理鹽水以沒過棉簽頭為宜,浸泡并震蕩1分鐘。
6. 精液:新鮮采集的精液,經室溫放置30min,至呈液化狀態;取其中1ml加入1.5ml離心管中,反復凍融不超過3次,以裂解細胞;離心3分鐘,取上清200ul用于核酸提取。
7. 病毒培養液:直接吸取200μL原液用于核酸提??;或者使用生理鹽水將原液稀釋1:10或1:100,取200μL用于核酸提取。
8. 活疫苗凍干粉:使用生理鹽水或疫苗稀釋液稀釋疫苗干粉(1mL/頭份),并充分搖勻,直接吸取200μL用于核酸提??;或使用生理鹽水將原液稀釋1:10或1:100,取200μL用于核酸提取。
9. 飼料:對飼料樣本先進行物理粉碎,然后浸泡15~30分鐘,離心取上清液200μL用于核酸提取。
10. 病料組織:剪取病料病變邊緣部位的組織,約米粒大小,置于1.5ml離心管中,吸取200ul生理鹽水加入離心管,研磨處理至組織塊完全分離,補充生理鹽水至500μL,充分混勻后,取200μL用于核酸提取,剩余的低溫留存用于復檢。
為什么要進行核酸提???